ГОСТ 7702.2.6-2015 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий

     8 Проведение исследований

8.1 Выявление вегетативных клеток сульфитредуцирующих клостридий включает в себя два этапа:

- определение сульфитредуцирующей способности микроорганизмов (см. 8.2);

- определение принадлежности выделенных микроорганизмов к клостридиям (см. 8.3).

Этапы могут выполняться в любой последовательности (в зависимости от способа проведения исследований).

8.2 При первом способе проведения исследования сначала определяют сульфитредуцирующую способность микроорганизмов. Для этого 1 г (см) пробы или ее последовательных разведений, приготовленных по ГОСТ 26669, высевают в чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670, с заливкой одной из агаризованных сред (см. 6.4, 6.6, 7.3.2, 7.3.3, 7.3.13) или в стерильные пробирки с заливкой столбиком высотой 10-12 см. Посевы помещают в анаэростат и инкубируют в соответствии с рекомендациями изготовителя. При отсутствии анаэростата на поверхность затвердевшей среды в чашки или пробирки наливают слой не менее 0,2 см голодного агара (см. 7.3.4). После его затвердения посевы инкубируют в обычных условиях в соответствии с рекомендациями изготовителя.

Для создания анаэробных условий вместо анаэростата допускается использование аппаратуры, позволяющей создавать анаэробиоз в отдельных емкостях или пакетах, которые затем могут инкубироваться в термостатах в аэробных условиях. Данное оборудование работает по принципу откачивания/замещения газов (см. 6.2).

При наличии сульфитредуцирующей способности у выделенных культур происходит почернение сульфитной среды.

8.2.1 Определяют принадлежность к клостридиям микроорганизмов из темно-серых или черных колоний, вызвавших почернение среды. Не менее пяти колоний пересевают в пробирки со средой Китт-Тароцци (см. 7.3.5) и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24-72 ч. При появлении признаков роста микроорганизмов (помутнение среды, выделение газа, появление постороннего запаха) проводят микроскопирование с окрашиванием мазков по Граму и окрашивание для выявления спор по ГОСТ 10444.1 (см. 7.3.6), определение каталазной активности. При этом культуру для мазков и исследований отбирают со дна пробирки.

8.2.2 Определение принадлежности микроорганизмов к клостридиям после определения сульфитредуцирующей способности допускается проводить на готовой улучшенной клостридиальной среде или приготовленной по пункту 5.47 ГОСТ 10444.1, или усиленном агаре для клостридий (см. 6.5).

8.2.3 Для определения каталазной активности на предметном стекле в каплю культуральной жидкости (см. 8.2.1) добавляют каплю перекиси водорода (см. 6.3) массовой концентрации 30 г/дм. Выделение пузырьков газа свидетельствует о каталазной активности.

Сульфитредуцирующие клостридии каталазы не образуют.

8.2.4 Для сульфитредуцирующих клостридий характерен анаэробный рост.

Для подтверждения анаэробного роста культуру из среды Китт-Тароцци пересевают в стерильные чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670 с заливкой одной из агаризованных сред по ГОСТ 7702.2.0 (пункты 2.4.1-2.4.5). Затвердевшую среду накрывают стерильным предметным стеклом, чашки переворачивают, посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч. Появление колоний в глубине агара на 2-3 мм от края стекла свидетельствует о принадлежности микроорганизмов к клостридиям.

Допускается вместо подтверждения анаэробного роста проводить определение отсутствия роста в аэробных условиях. При этом культуры высевают в чашки Петри на поверхность агаризованной среды. Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37±1)°С в течение 18-72 ч.

8.3 При втором способе проведения исследования сначала пробу высевают в среду Китт-Тароцци, инкубируют, проводят микроскопирование, определение каталазы, пересев под стекло (см. 8.2.4). Определив принадлежность микроорганизмов к клостридиям, проводят пересев на железосульфитсодержащие среды (см. 6.4, 6.6, 7.3.2, 7.3.3, 7.3.13). Определяют сульфитредуцирующую способность выделенных клостридий по 8.2.

8.4 Выделение спор сульфитредуцирующих клостридий проводят после прогревания исследуемого материала. Пробирки с исследуемой пробой и (или) ее разведений помещают в водяную баню температурой (80±1)°С.

Воду в бане нагревают до достижения внутри пробы температуры (80±1)°С, которую определяют термометром в контрольной параллельной пробирке со средой без посева. Прогрев проводят в течение (20±1) мин. Затем пробирки с исследуемым материалом охлаждают водопроводной водой. Далее исследование проводят по 8.2.

8.5 Определение количества сульфитредуцирующих клостридий

8.5.1 Определение количества сульфитредуцирующих клостридий проводят методом посева в железосульфитсодержащие агаризованные среды по методу НВЧ.

8.5.2 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий методом посева в агаризованные среды по 1 см разведений пробы вносят в две чашки Петри. Посевы заливают одной из железосульфитсодержащих агаризованных сред (см. 6.4, 6.6, 7.3.2, 7.3.3, 7.3.13). Проводят инкубирование в анаэробных условиях по 8.2 с последующим подсчетом.

При количественном определении необходимо проводить подтверждение принадлежности к сульфитредуцирующим клостридиям колоний, выросших на железосульфитсодержащих средах.

8.5.3 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных 10-кратных разведения в регенерированную среду Китт-Тароцци. Каждое разведение в трехкратной повторности, соотношение высеваемого материала к питательной среде 1:9. Инкубирование посевов выделенной культуры проводят по 8.2.