ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Приложение G
(обязательное)

Использование контрольных графиков для мониторинга количественных испытаний плотных питательных сред

G.1 Общие положения

Настоящее приложение содержит описание применения контрольных графиков для мониторинга результатов, в частности тех, которые выражены в виде коэффициента производительности P, как это описано в 7.2, при испытаниях селективных и неселективных агаровых сред по сравнению с подходящими неселективными эталонными агаровыми средами или предварительно принятыми партиями той же селективной агаровой среды.

Необходимо внимательно применять контрольные графики в случае испытаний различных партий одного и того же агара, так как любое ухудшение качества последовательных партий может быть незаметно до тех пор, пока испытуемые суспензии не будут тщательно контролироваться в плане получения требуемого количества микроорганизмов или не будут применяться эталонные среды (см. 3.4.6). Любая система QC среды, основанная на проверках от партии к партии, должна быть проверена на пригодность для цели предназначения перед ее использованием.

Каждый источник и партия испытуемого агара, вероятнее всего, продемонстрируют различные уровни производительности, и отдельные лаборатории могут использовать различные виды эталонного агара в сравнительных испытаниях с испытуемыми видами агара. Таким образом, отдельные лаборатории должны установить и обосновать свои собственные пределы и/или диапазоны приемлемых значений коэффициента производительности для каждого испытуемого агара при повседневном использовании в пределах значений коэффициента производительности, указанных в 7.2.2.1.2. Контрольные графики составляют на основе начальных данных валидации, пределы приемлемости устанавливают при использовании статистического анализа и затем графики используют для мониторинга последовательных партий агара. Пределы приемлемости пересматривают периодически (например, после прохождения каждых 30 испытаний) и при необходимости корректируют (соответствующая информация приведена в G.2.6).

Данные процедуры требуют использования микробной суспензии с известной концентрацией целевого штамма, установленного для питательной среды в приложении Е или F; это целевое значение для испытания. Испытуемой суспензией должна быть коммерческая эталонная среда (см. 3.4.6) или суспензия, приготовленная в лаборатории из тщательно стандартизованных рабочих культур эталонных штаммов. В течение периода использования концентрация микроорганизмов в лабораторной суспензии (целевое число) должна быть стабильной и суспензия должна быть гомогенной.

В целях оптимизации контроля данные суспензии должны содержать приблизительно 100 КОЕ (диапазон должен быть от 80 до 120 КОЕ) в объеме инокулята, который применяют к питательной среде в чашке, и испытание, как правило, проводят по меньшей мере дважды. В таблице 1 (см. 5.4.2.5.1) приведены значения прецизионности при различных уровнях инокулирования с тем, чтобы показать важность сохранения данного оптимального уровня инокулята.

Слои агара инокулируют методами распределения, добавления или мембранной фильтрации в соответствии с эталонным стандартным методом, в котором применяют агар, и инкубируют в условиях, установленных в конкретных стандартах.

Колонии, присутствующие на или в каждом слое, подсчитывают в соответствии с эталонными стандартными методами, а коэффициенты производительности рассчитывают согласно 7.2.1.1.

G.2 Применение контрольных графиков

G.2.1 Общие методики

Для составления нового контрольного графика необходимо провести не менее 10 испытаний на различных партиях одного и того же испытуемого агара, желательно в двух повторностях, проводя испытания в разные дни и с участием различных операторов (условия межлабораторной воспроизводимости). Проведение 20 испытаний (как это показано в методике в G.2.2) позволит получить более надежные значения пределов, и, таким образом, график, на котором обозначены 10 начальных испытаний (минимальное количество), необходимо пересчитать, когда станут доступны данные о 20 результатах. Индивидуальные графики используют на постоянной основе с не менее 30 испытаниями для каждой повторяющейся оценки текущего качества сред (см. G.2.6).

G.2.2 Составление контрольных графиков

Данная методика основана на стандартном инокуляте, содержащем (100±20) КОЕ в 0,1 см инокулята, используемого для испытания, проводимого методом распределения по слою. Она также пригодна при использовании других объемов инокулята и при других методах посева, таких как глубинный посев или мембранная фильтрация, при условии, что инокулят содержит количество колониеобразующих единиц, лежащее в диапазоне приемлемости - (100±20) КОЕ.

Среднее значение двух серий дублей при испытании i равно х КОЕ/0,1 см для испытуемой среды и y КОЕ/0,1 см для контрольной среды. Далее, коэффициент производительности при испытании i равен х/y=r. Для серии испытаний, i =1, 2, ..., n, где n - минимум равно 10 и желательно, чтобы было равно 20, среднее значение коэффициента производительности вычисляют по формуле:

.                                                (G.1)

Средний диапазон значений коэффициента производительности вычисляют по формуле:

,                                                     (G.2)

где i - номер испытания;

n - общее количество испытаний;

- значение P при i-испытании.

Далее определяют стандартное отклонение s по формуле:

.                                                     (G.3)

Примечание - Константа 0,8865 (или обратное ей число 1,128) - стандартизованное значение, рекомендуемое ASTM для определения стандартного отклонения из среднего диапазона дублированных значений результатов испытаний.

Рассчитывают 95% (±2s) и 99% (±3s) пределы распределения результатов.