ГОСТ 34448-2018 Мясо и мясные продукты. Методы определения L-(+)-глутаминовой кислоты

     5 Спектрофотометрический метод

5.1 Сущность метода

L-(+)-глутаминовую кислоту экстрагируют из пробы, подготовленной по 4.2, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование L-(+)-глутамата в -кетоглутамат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):

.       (1)

Затем окисляют эквивалентное количество восстановленной формы НАДН хлоридом иодонитротетразолия (ИНТ) в присутствии липоамиддегидрогеназы (ЛАДГ):

.            (2)

Измеряют оптическую плотность образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм и окончательно рассчитывают массовую долю L-(+)-глутаминовой кислоты. Диапазон измерений массовой доли L-(+)-глутаминовой кислоты составляет от 0,01 до 0,14%.

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Мясорубка механическая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469, с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.

Гомогенизатор.

Ледяная баня.

Контейнеры для хранения проб.

Лабораторная центрифуга с центрифужными пробирками вместимостью 50 или 100 см, которая обеспечивает центрифугирование при 2000 g.

рН-метр с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. рН с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,02 ед. рН.

Термометр жидкостный стеклянный лабораторный по ГОСТ 29224, с диапазоном измерения температуры от 0 до 100°С и ценой деления 1°С.

Бумажный фильтр диаметром 15 см.

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические Кн-1-10-14/23 ТС, Кн-1-50-14/23, Кн-1-250-24/29 ТС по ГОСТ 25336.

Воронки В-56-80 ХС, В-75-80 ХС по ГОСТ 25336.

Стакан В-1-100 ТХС по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные 1-1-1-1, 1-2-1-1, 1-1-1-5, 1-2-1-5, 1-1-1-10, 1-2-1-10, 1-1-1-25, 1-2-1-25 по ГОСТ 29227 или дозаторы автоматические с переменным объемом дозирования и относительной погрешностью дозирования ±1%.

Фотометрические кварцевые кюветы со слоем поглощения 10 мм.

Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны 492 нм.

Пластиковые шпатели или стеклянные палочки.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального или высокого класса точности или лабораторные весы по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±1,00 мг.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696 первой степени очистки.