5.1 Идентификационные характеристики гиалуроновой кислоты можно установить несколькими способами, приведенными в 5.1.1, 5.1.2.
5.1.1 Инфракрасная спектроскопия с использованием преобразования Фурье (FT-IR)
Почти все органические химические соединения поглощают инфракрасное излучение на частотах, которые характерны для функциональных групп в соединении. Анализ гиалуронового порошка с помощью спектроскопии Фурье является наиболее простым способом. Типичные частоты, см, для натриевой соли гиалуроновой кислоты: 3275-3390, 1615, 1405, 1377, 1150, 1077, 1045, 946, 893. Обозначения пиков: острый, сильный, средний, слабый, широкий. Типичный спектр Фурье представлен на рисунке 1.
Рисунок 1 - ИК-спектр гиалуроновой кислоты с преобразованием Фурье, натриевая соль с использованием нарушенного полного внутреннего отражения
5.1.2 Состав и последовательность структуры гиалуроновой кислоты
Состав и последовательность структуры гиалуроновой кислоты можно определить при помощи ядерной магнитно-резонансной (ЯМР) спектроскопии с высоким разрешением 1Н и 13С. На рисунке 2 представлен типичный ЯМР-спектр с разрешением 1Н. Литературные ссылки, касающиеся определения состава и структуры гиалуронатов, приведены в [1]-[4].
5.2 Молекулярная масса (молекулярный вес) будет определять эксплуатационные характеристики МИ, такие как вязкость и/или прочность геля.
Молекулярная масса может быть определена с помощью методов, приведенных в 5.2.1-5.2.3.
5.2.1 Определение молекулярной массы по характеристической вязкости
Характеристическая вязкость описывает способность гиалуроновой кислоты образовывать водные растворы и является прямопропорциональной величине средней молекулярной массы полимера (М), не зависит от концентрации полимера и вычисляется в капиллярном вискозиметре по уравнению Марка-Куна-Хаувинка:
. (1)
Для натриевой соли гиалуроновой кислоты константа К составляет 0,00057, показатель - 0,75 при следующих условиях: 0,15М NaCI в фосфатном буфере, рН 7,5, температура 20°С [5].
Рисунок 2 - 1Н ЯМР-спектр гиалуроната из петушиного гребня (~ 700000)
5.2.2 Определение молекулярной массы по закону капиллярного течения Пуазейля
Перепад давления жидкости, протекающей через капилляр, измеренный датчиком перепада давления, прямо пропорционален вязкости и вычисляется по соотношению:
, (2)
где - вязкость;
- скорость течения жидкости;